Análisis analítico
¿Qué es el análisis HPLC y qué puede medir?
Cómo funciona la cromatografía líquida de alta eficacia, qué representa un cromatograma y dónde terminan sus conclusiones.
Por Equipo de Investigación de Astra
Respuesta rápida
HPLC es una técnica que separa los componentes de una mezcla líquida al hacerlos pasar por una columna. El detector registra señales en un cromatograma; su interpretación depende de las condiciones, los estándares y la validación del método.
Puntos clave
- HPLC separa antes de medir.
- El tiempo de retención depende de las condiciones del método.
- El área de pico puede apoyar una cuantificación si el método está preparado para ello.
- Una señal no detectada no equivale siempre a ausencia.
- HPLC y espectrometría de masas responden preguntas complementarias.
¿Cómo funciona un sistema HPLC?
La muestra se introduce en una fase móvil impulsada a presión a través de una columna. Sus componentes interactúan de forma diferente con la fase estacionaria y salen en momentos distintos. Un detector transforma esa salida en señales que forman el cromatograma.
| Componente | Función |
|---|---|
| Reservorio y bomba | Suministran la fase móvil con flujo controlado |
| Inyector o automuestreador | Introduce un volumen definido de muestra |
| Columna | Produce la separación de los componentes |
| Detector | Registra una respuesta asociada a los compuestos que eluyen |
| Sistema de datos | Representa e integra el cromatograma |
Cómo leer un cromatograma
El eje horizontal representa el tiempo y el vertical la respuesta del detector. El tiempo de retención ayuda a comparar una señal con un estándar bajo condiciones equivalentes. El área de un pico refleja la respuesta integrada, pero convertirla en concentración exige calibración y un procedimiento cuantitativo adecuado.
La calidad del resultado depende del método
La composición de la fase móvil, el tipo de columna, el gradiente, la temperatura, el flujo, la longitud de onda y el procesamiento afectan la separación. Comparar porcentajes procedentes de métodos diferentes sin revisar esas condiciones puede ser engañoso.
Preguntas frecuentes
Respuestas directas
¿Qué mide el área de un pico HPLC?
Mide la respuesta integrada del detector para esa señal. Puede relacionarse con cantidad o concentración cuando existe una calibración adecuada y el método es válido para ese propósito.
¿Qué es el tiempo de retención?
Es el tiempo que tarda una señal en llegar al detector bajo unas condiciones cromatográficas definidas. Sirve para comparar, pero depende del método y no es una identificación absoluta.
Fuentes
Referencias
- 1. Premnath SM, Zubair M. Chromatography. StatPearls, NCBI Bookshelf. 2024. Consultar fuente
- 2. Sander LC. Liquid Chromatography: Introduction and Instrumentation. Journal of Research of the National Institute of Standards and Technology 122:1. 2017. Consultar fuente
- 3. U.S. Food and Drug Administration. Analytical Procedures and Methods Validation for Drugs and Biologics. Guidance for Industry. 2015. Consultar fuente
- 4. Zeng K, Geerlof-Vidavisky I, Gucinski AC, Jiang X, Boyne MT. Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry for Peptide Drug Quality Control. The AAPS Journal 17(3):643–651. 2015. Consultar fuente
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